Ib qho ntawm cov txiaj ntsig tseem ceeb ntawm kab lis kev cai ntawm tes yog lub peev xwm los tswj lub cev chemistry ntawm kev tsim tawm ntawm tes (xws li kub, pH, osmotic siab, O2 thiab CO2 nro) thiab lub cev ib puag ncig (xws li cov tshuaj hormones thiab cov khoom noj khoom haus concentration).Ntxiv nrog rau qhov kub thiab txias, kab lis kev cai ib puag ncig yog tswj los ntawm kev loj hlob nruab nrab.
Txawm hais tias lub physiological ib puag ncig ntawm kab lis kev cai tsis meej raws li nws lub cev thiab tshuaj ib puag ncig, kev nkag siab zoo dua ntawm cov khoom siv hauv cov ntshav, kev txheeb xyuas cov yam tseem ceeb uas yuav tsum tau muaj rau kev loj hlob, thiab kev nkag siab zoo dua ntawm microenvironment ntawm cov hlwb hauv kab lis kev cai.(Piv txwv li kev sib cuam tshuam ntawm tes, roj diffusion, kev sib cuam tshuam nrog cov matrix) tam sim no tso cai rau qee cov kab ntawm tes los ua kab lis kev cai hauv cov xov xwm tsis pub dawb.
1.Culture ib puag ncig cuam tshuam kev loj hlob ntawm tes
Thov nco ntsoov tias cov kab lis kev cai ntawm tes sib txawv rau txhua hom cell.
Qhov tshwm sim ntawm deviating los ntawm kab lis kev cai tej yam kev mob yuav tsum tau rau ib tug tshwj xeeb cell hom muaj xws li los ntawm kev qhia ntawm txawv txav phenotypes mus rau tag nrho tsis ua hauj lwm ntawm cell kab lis kev cai.Yog li ntawd, peb xav kom koj paub txog cov kab ntawm tes uas koj nyiam thiab ua raws li cov lus qhia uas tau muab rau txhua yam khoom koj siv hauv koj qhov kev sim.
2.Kev ceev faj rau kev tsim kom muaj qhov zoo tshaj plaws ntawm tes kab lis kev cai ib puag ncig rau koj lub hlwb:
Culture media thiab serum (saib hauv qab no kom paub ntau ntxiv)
pH thiab CO2 theem (saib hauv qab no yog xav paub ntxiv)
Cultivate yas (saib hauv qab no yog xav paub ntxiv)
Kub (saib hauv qab no kom paub ntxiv)
2.1 Cultural Media thiab Serum
Cov kab lis kev cai nruab nrab yog qhov tseem ceeb tshaj plaws ntawm kab lis kev cai ib puag ncig, vim tias nws muab cov as-ham, kev loj hlob thiab cov tshuaj hormones xav tau rau kev loj hlob ntawm tes, thiab tswj cov pH thiab osmotic siab ntawm kab lis kev cai.
Txawm hais tias thawj zaug kev sim kab lis kev cai ntawm tes tau ua los ntawm kev siv cov xov xwm ntuj tau los ntawm cov ntaub so ntswg thiab cov kua dej hauv lub cev, qhov xav tau rau kev tsim qauv, kev tshaj tawm zoo, thiab kev xav tau ntau ntxiv tau coj mus rau kev tsim cov xov xwm tseeb.Peb hom kev tshaj tawm yog cov xov xwm basal, txo cov xov xwm tawm thiab cov xov xwm tsis muaj ntshav, thiab lawv muaj cov kev cai sib txawv rau cov tshuaj ntxiv.
2.1.1 Basic Medium
Gibco cell culture nruab nrab
Cov kab cell feem ntau loj hlob zoo hauv cov xov xwm yooj yim uas muaj cov amino acids, vitamins, inorganic ntsev, thiab cov pa roj carbon monoxide (xws li qabzib), tab sis cov qauv xov xwm tseem ceeb no yuav tsum tau ntxiv nrog cov ntshav.
2.1.2 Txo cov ntshav nruab nrab
Lub raj mis nrog Gibco Low Serum Medium
Lwm lub tswv yim los txo cov kev tsis zoo ntawm cov ntshav hauv cov kev sim kab lis kev cai ntawm tes yog siv cov tshuaj tua kab mob txo qis.Txo cov ntshav nruab nrab yog cov qauv nruab nrab nruab nrab uas muaj cov khoom noj muaj txiaj ntsig thiab cov khoom siv tsiaj, uas tuaj yeem txo cov ntshav qab zib kom tsawg.
2.1.3 Serum-dawb nruab nrab
Lub raj mis nrog Gibco serum-dawb nruab nrab
Serum-dawb nruab nrab (SFM) cuam tshuam kev siv tsiaj cov ntshav los ntawm kev hloov ntshav nrog cov khoom noj khoom haus tsim nyog thiab cov tshuaj hormones.Ntau lub hauv paus kab lis kev cai thiab cov kab xov tooj ntawm tes muaj cov qauv nruab nrab tsis pub dawb, suav nrog Suav Hamster Ovary (CHO) recombinant protein ntau lawm kab, ntau yam hybridoma cell kab, kab kab Sf9 thiab Sf21 (Spodoptera frugiperda), thiab rau tus tswv tsev rau cov kab mob tsim tawm. (piv txwv li, 293, VERO, MDCK, MDBK), thiab lwm yam. Ib qho ntawm cov txiaj ntsig tseem ceeb ntawm kev siv cov tshuaj dawb dawb yog qhov muaj peev xwm ua kom muaj kev xaiv nruab nrab rau cov hom cell tshwj xeeb los ntawm kev xaiv qhov tsim nyog ua ke ntawm kev loj hlob.Cov lus hauv qab no qhia txog qhov zoo thiab qhov tsis zoo ntawm cov tshuaj tsis muaj ntshav qab zib.
Qhov zoo
Ua kom pom tseeb
Kev ua tau zoo sib xws
Yooj yim purification thiab downstream processing
Txheeb xyuas qhov ua haujlwm ntawm tes
Ua kom cov khoom tsim tau
Kev tswj kom zoo dua ntawm cov tshuaj tiv thaiv physiological
Txhim kho cell media nrhiav kom tau
Qhov tsis zoo
Cell hom tshwj xeeb nruab nrab cov qauv xav tau
Xav tau ntau dua reagent purity
Kev loj hlob qeeb
2.2.1 pH qib
Feem ntau cov kab mob ntawm cov tsiaj nyeg loj hlob zoo ntawm pH 7.4, thiab qhov sib txawv ntawm cov kab sib txawv me me.Txawm li cas los xij, qee cov kab hloov pauv ntawm tes tau pom tias muaj kev loj hlob zoo dua nyob rau hauv ib puag ncig acidic me ntsis (pH 7.0 - 7.4), thaum qee cov kab mob fibroblast cell nyiam me ntsis alkaline ib puag ncig (pH 7.4 - 7.7).Kab kab kab xws li Sf9 thiab Sf21 loj hlob zoo tshaj plaws ntawm pH 6.2.
2.2.2 CO2 qib
Qhov nruab nrab loj hlob tswj pH ntawm kab lis kev cai thiab buffers cov hlwb hauv kab lis kev cai kom tiv thaiv kev hloov pauv hauv pH.Feem ntau, qhov buffering no ua tiav los ntawm cov organic (piv txwv li, HEPES) lossis CO2-bicarbonate-based buffers.Vim tias pH ntawm qhov nruab nrab nyob ntawm qhov sib npaug ntawm cov pa roj carbon dioxide yaj (CO2) thiab bicarbonate (HCO3-), cov kev hloov hauv atmospheric CO2 yuav hloov pH ntawm nruab nrab.Yog li ntawd, thaum siv ib tug nruab nrab buffered nrog ib tug CO2-bicarbonate-raws li tsis, nws yog tsim nyog los siv exogenous CO2, tshwj xeeb tshaj yog thaum culturing hlwb nyob rau hauv qhib kab lis kev cai tais diav los yog culturing transformed cell kab ntawm high concentrations.Txawm hais tias feem ntau cov kws tshawb fawb feem ntau siv 5-7% CO2 hauv huab cua, feem ntau cov kev sim kab lis kev cai ntawm tes feem ntau siv 4-10% CO2.Txawm li cas los xij, txhua qhov nruab nrab muaj qhov pom zoo CO2 nro thiab bicarbonate concentration kom ua tiav pH thiab osmotic siab;Yog xav paub ntxiv, thov xa mus rau lub chaw tsim khoom nruab nrab cov lus qhia.
2.3 Cultivating plastics
Cell kab lis kev cai yas muaj nyob rau hauv ntau hom, qhov ntau thiab tsawg thiab qhov chaw kom haum rau ntau hom kab lis kev cai ntawm tes.Siv lub cell kab lis kev cai yas nto daim ntawv qhia thiab cell kab lis kev cai thawv qhia hauv qab no los pab koj xaiv cov yas zoo rau koj daim ntawv thov kab lis kev cai ntawm tes.
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2.4 Kub
Qhov ntsuas kub zoo tshaj plaws rau kab lis kev cai ntawm tes yog nyob ntawm qhov loj ntawm lub cev kub ntawm tus tswv tsev los ntawm cov hlwb raug cais tawm, thiab tsawg dua ntawm cov kev hloov pauv hauv qhov kub thiab txias (piv txwv li, qhov kub ntawm daim tawv nqaij yuav qis dua li cov leeg pob txha. ).Rau cov kab lis kev cai ntawm tes, Overheating yog qhov teeb meem loj dua li overheating.Yog li ntawd, qhov kub ntawm lub incubator feem ntau yog teem me ntsis hauv qab qhov zoo tshaj plaws kub.
2.4.1 Qhov kub zoo tshaj plaws rau ntau cov kab ntawm tes
Feem ntau ntawm tib neeg thiab tsiaj cov kab cell raug khaws cia ntawm 36 ° C mus rau 37 ° C rau kev loj hlob zoo.
Kab kab yog cog ntawm 27 ° C rau kev loj hlob zoo;Lawv loj hlob qeeb qeeb ntawm qhov kub thiab txias ntawm 27 ° C thiab 30 ° C.Tshaj li 30 ° C, qhov tseem ceeb ntawm cov kab mob txo qis, txawm tias nws rov qab mus rau 27 ° C, cov hlwb yuav tsis zoo.
Avian cell kab xav tau 38.5 ° C kom ncav cuag kev loj hlob siab tshaj plaws.Txawm hais tias cov hlwb no tuaj yeem khaws cia ntawm 37 ° C, lawv yuav loj hlob qeeb dua.
Cov kab ntawm tes muab tau los ntawm cov tsiaj ntshav txias (xws li amphibians, ntses dej txias) tuaj yeem tiv taus qhov kub ntawm 15 ° C txog 26 ° C.
Post lub sij hawm: Feb-01-2023